皺紋盤鮑HdhTPX2基因在畢赤酵母中的表達(dá)及抗氧化活性研究
關(guān)鍵詞：皺紋盤鮑 硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶 畢赤酵母 抗氧化
摘要：為研究皺紋盤鮑Haliotis discus hannai Ino硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX2)蛋白的抗氧化活性,將HdhTPX2基因克隆至pPIC9K載體,通過(guò)電擊轉(zhuǎn)化至畢赤酵母GS115菌株中,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K-HdhTPX2,經(jīng)甲醇誘導(dǎo)及親和層析純化得到重組HdhTPX2蛋白,并進(jìn)行質(zhì)譜鑒定及體外抗氧化功能檢測(cè)。結(jié)果表明:本研究中成功構(gòu)建了重組畢赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,經(jīng)表達(dá)條件的優(yōu)化,在pH為7的培養(yǎng)基中用0.5%甲醇誘導(dǎo)表達(dá)72 h,分泌表達(dá)上清液中得到相對(duì)分子質(zhì)量約為25 000的穩(wěn)定表達(dá)產(chǎn)物,純化后的蛋白經(jīng)質(zhì)譜鑒定為目的蛋白;體外活性測(cè)定發(fā)現(xiàn),該蛋白清除羥自由基(·OH)能力強(qiáng)于維生素C,并對(duì)H2O2引起的細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用。研究表明,皺紋盤鮑硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶HdhTPX2在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中得到高效表達(dá),重組表達(dá)產(chǎn)物具有抗氧化活性功能。
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