低氧激活HIF-1α抑制人牙周膜成纖維細胞的成骨分化
關鍵詞：牙周炎 人牙周膜成纖維細胞 低氧 成骨分化
摘要：目的探討低氧環境對人牙周膜成纖維細胞（periodontalligamentcells，PDLCs）成骨分化的影響，以及低氧誘導因子?1α（hypoxiainduciblefactor?1α，HIF?1α）在該過程中的作用。方法組織塊法原代分離牙周膜標本中PDLCs，采用激光共聚焦檢測波形蛋白與細胞角蛋白表達。PDLCs分別在常氧（20%體積分數O2）培養以及低氧（1%體積分數O2）培養12～72h，檢測常氧組與低氧組PDLCs堿性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）活性，比較成骨標志物ALP、I型膠原（Collogen?1，COL1）、成骨特異性轉錄因子（runtrelatedtranscriptionfactor2,RUNX2）的mRNA表達量變化，Western免疫印跡檢測HIF?1α表達水平。進一步轉染小干擾RNA（HIF?1α?siRNA1，2），檢測低氧環境中PDLCs的HIF?1α水平、ALP活性與成骨標志物mRNA表達變化。采用SPSS13.0軟件包對數據進行統計學分析。結果組織塊法成功獲取PDLCs，PDLCs中波形蛋白陽性表達、細胞角蛋白陰性表達。低氧環境中培養48h后PDLCs中ALP活性下降，ALP、COL1、RUNX2的mRNA表達量顯著降低，但HIF?1α蛋白表達升高。HIF?1α?siRNA成功敲低PDLCs中HIF?1α表達，敲低HIF?1α的PDLCs在低氧環境中的ALP活性升高，ALP、COL1、RUNX2的mRNA表達量增加。結論長時間低氧處理能抑制PDLCs成骨分化，敲低HIF?1α表達可逆轉低氧對PDLCs成骨分化的抑制作用。
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