基于5-甲基胞嘧啶抗體的DNA甲基化電化學(xué)檢測
關(guān)鍵詞：dna甲基化 電化學(xué)傳感器 抗體 定量分析
摘要：目的:構(gòu)建一種基于5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗體的電化學(xué)生物傳感器,用于DNA多甲基化位點的定量分析。方法:采用納米金修飾金電極(AuNPs/Au),以自組裝方式依次將單鏈DNA(ssDNA)、巰基己醇(MCH)和靶DNA連接到AuNPs/Au上制備DNA電化學(xué)傳感器,經(jīng)過電化學(xué)表征檢測電極修飾效果;再以5-mC抗體特異性識別靶DNA中的甲基化位點,并以辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗(HRP-IgG)為信號示蹤物,優(yōu)化雜交時間及抗5-mC抗體濃度;采用差分脈沖伏安法(DPV)分別檢測非甲基化與不同數(shù)量甲基化DNA的電化學(xué)信號,同時考察該方法的重復(fù)性與穩(wěn)定性。結(jié)果:電化學(xué)表征結(jié)果表明電極修飾成功,優(yōu)化實驗條件結(jié)果顯示最優(yōu)雜交時間為90 min、最佳抗體濃度為10 mg/L,在該條件下DNA電化學(xué)傳感器能有效區(qū)分甲基化與非甲基化DNA,并且DPV峰電流的大小與DNA甲基化位點的數(shù)量呈線性關(guān)系,具有較好的重復(fù)性與穩(wěn)定性。結(jié)論:制備的DNA電化學(xué)傳感器能對多個位點的DNA甲基化定量檢測,有望成為臨床DNA甲基化位點定量檢測的有效手段。
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