新生鼠原代肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的分離、純化與鑒定
關(guān)鍵詞：肺泡二型上皮細(xì)胞 原代分離 純化 原代培養(yǎng) 新生鼠
摘要：目的從新生SD大鼠體內(nèi)分離提取肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,為肺部相關(guān)疾病提供體外模型方法胰蛋白酶、膠原酶Ⅰ消化分離細(xì)胞,差速貼壁法和大鼠IgG免疫黏附法純化。采用倒置顯微鏡、透射電鏡、共聚焦顯微鏡以及BCIP/NBT堿性磷酸試劑盒對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀(guān)察和鑒定。結(jié)果采取胰蛋白酶、膠原酶消化得到細(xì)胞,活力為(94.82±1.64)%,純度為(95.96±0.90)%。倒置顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)呈立方形,島狀生長(zhǎng),胞漿內(nèi)有黑色顆粒;透射電鏡下觀(guān)察到特異性板層小體;共聚焦顯微鏡下可看到表面活性蛋白C表達(dá);BCIP/NBT堿性磷酸試劑盒鑒定后可觀(guān)察到細(xì)胞胞漿內(nèi)有深藍(lán)色顆粒。結(jié)論用胰蛋白酶、膠原酶Ⅰ消化可得到高純度的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,可滿(mǎn)足體外實(shí)驗(yàn)的需要。
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