希金斯刺盤孢T-DNA插入突變體表型篩選及其特性分析
關鍵詞：希金斯刺盤孢 農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化 突變體 致病性 插入位點
摘要：以希金斯刺盤孢菌株Ch-1為供試野生型菌株,通過農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化方法獲得含2000個轉(zhuǎn)化子的T-DNA插入突變體庫,篩選菌落生長異常或致病缺陷突變體,分析致病缺陷突變體的T-DNA插入拷貝數(shù)和位點。結(jié)果顯示,篩選到14株菌落異常突變體,包括2株生長緩慢突變體Ch-1-E393和Ch-1-C135、12株菌落形態(tài)異常突變體(包括色素異常、菌落扇變或菌絲坍塌現(xiàn)象),另外篩選到1株致病缺陷突變體Ch-1-G090。致病性測定結(jié)果表明,致病缺陷突變體Ch-1-G090接種擬南芥后,葉片發(fā)病明顯減弱,且未產(chǎn)生水漬狀病斑。顯微觀察發(fā)現(xiàn)該突變體分生孢子在葉片上僅能產(chǎn)生少量初生菌絲,不能正常形成次生菌絲。Southern雜交顯示,致病缺陷突變體Ch-1-G090為T-DNA雙拷貝插入;通過Inverse-PCR法獲得插入T-DNA的側(cè)翼序列,明確該突變體T-DNA插入位點分別為假定蛋白(Ch063_10682)和RNA加工蛋白FCF1(CH063_10671)編碼區(qū)。
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