缺氧微環境對宮頸癌Hela細胞HIF-1α及VEGF—A表達的影響
關鍵詞：缺氧微環境 宮頸癌 二氯化鈷
摘要：目的： 研究在缺氧微環境下人宮頸癌Hela細胞中缺氧誘導因子1α（HIF-1α）和血管內皮生長因子A（VEGF-A）的表達。方法： 采用CoCl2構建Hela細胞體外缺氧微環境模型，使用CCK8法來檢測細胞的增殖；使用實時熒光定量PCR法分別來檢測HIF-1α和VEGF-A mRNA表達的變化；免疫細胞化學技術檢測HIF-1α和VEGF-A蛋白的表達。結果： CCK8檢測結果發現，CoCl2誘導的缺氧微環境能降低Hela細胞的增殖活性，隨著CoCl2濃度的增加其增殖活性逐漸降低，在150 μmol/L時降到最低，各濃度組間總體差異有統計學意義（F = 10.118，P = 0.001，P 〈 0.05），在相同CoCl2濃度構建的缺氧微環境中，隨著缺氧時間的延長，其細胞增殖活性逐漸降低，在12 h降至最低，而后增殖活性增加，各時間組總體差異有統計學意義（F = 9.727，P = 0.002，P 〈 0.005）。實時熒光定量PCR結果發現同對照組比較，缺氧處理3 h， HIF-1α和VEGF-A的mRNA表達無明顯差異（P = 0.86，P = 0.72，P ＞ 0.05）；隨著缺氧時間增加，HIF-1α的mRNA表達在12 h時達峰值，隨后下降，各時間組比較差異有統計學意義（F = 1.627，P ＜ 0.001）。VEGF-A mRNA表達隨著缺氧時間的增加逐漸增加，各時間組比較差異有統計學意義（F = 7.407，P ＜ 0.001）。HIF-1α和VEGF-A在mRNA表達水平上無相關性（r = 0.647，P 〉 0.05）；免疫細胞化學檢測發現，在150 μmol/LCoCl2構建的缺氧微環境下，隨著時間延長HIF-1α蛋白表達逐漸增加，在12 h達到峰值，而后下降（F = 100.930，P 〈 0.001）；VEGF的蛋白表達隨時間延長而逐漸增加（F = 118.336，P 〈 0.001）。HIF-1α和VEGF-A在蛋白表達水平上呈正相關（r = 0.892，P 〈 0.05）。結論：CoCl2誘導的缺氧微環境能使Hela 細胞中HIF-1α的表達，促進其下游靶基因VEGF-A在mRNA及蛋白水平表達升高。
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