不結球白菜BcSERK1基因的克隆及表達分析
關鍵詞：不結球白菜 bcserk1 克隆 序列分析 亞細胞定位
摘要：[目的]本文旨在研究不結球白菜BcSERK1基因及其在胚胎發生中的作用。[方法]采用同源克隆的方法從不結球白菜‘二樁白’中克隆到BcSERK1基因全長序列,利用生物信息學分析其結構特征,并與其他物種進行氨基酸序列比對和進化分析,同時利用基因槍介導的方法進行亞細胞定位;利用小孢子培養技術研究不結球白菜‘二樁白’和‘四九菜心’小孢子培養出胚情況;采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)分析BcSERK1基因在2個品種不同組織和在小孢子胚胎發生早期的表達特征。[結果]BcSERK1含有1個1 878 bp開放閱讀框,編碼625個氨基酸。與其他物種的氨基酸序列比對和系統進化分析結果顯示:BcSERK1在進化過程中保守程度較高,與甘藍型油菜親緣關系最近。亞細胞定位結果顯示:BcSERK1蛋白定位于細胞膜上。游離小孢子培養結果顯示:‘二樁白’出胚率較高,每蕾6.67個胚,而‘四九菜心’不出胚。RT-qPCR結果表明:BcSERK1在2個品種不同組織中均有表達,除根外‘四九菜心’的組織中其表達量均低于‘二樁白’;在小孢子胚胎發生早期,BcSERK1基因在‘二樁白’不同培養時間的表達量均高于‘四九菜心’。[結論]BcSERK1蛋白在進化過程中保守性較高,定位于細胞膜上;SERK1基因在2個不結球白菜品種中的差異表達表明該基因對胚胎發生具有重要作用。
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