13C6-酪氨酸標記的蛋清溶菌酶的表達及NMR測定
王瑞英; 余飛; 劉萬卉 煙臺大學新型制劑與生物技術藥物研究山東省高校協同創新中心、分子藥理和藥物評價教育部重點實驗室(煙臺大學); 山東煙臺264005; 綠葉制藥集團有限公司; 山東煙臺264003
關鍵詞：選擇性標記 nmr 蛋清溶菌酶 酪氨酸 蛋白質的表達純化
摘要：針對蛋白質核磁共振(NMR)信號復雜難以解析的問題,選用選擇性標記方法可簡化蛋白質NMR譜圖。本實驗以蛋清溶菌酶(HEL)為目標蛋白,構建了pET-HEL蛋白表達載體,轉入到大腸桿菌Ε.coliBL21(DE3)中,得到重組菌株。然后通過改變誘導溫度、誘導濃度以及誘導時間等條件來優化HEL在大腸桿菌Ε.coliBL21(DE3)中的表達條件,通過SDS-PAGE電泳分析,確定了最佳表達條件:37℃、0.4mmol/LIPTG誘導8h。按最佳條件于誘導前加入13C6-酪氨酸進行選擇性標記,擴大表達,經過變復性處理與Ni柱純化后,獲得選擇性標記的HEL。進一步制備標記蛋白核磁樣品進行測定,得到簡化的NMR譜。本研究為采用NMR簡化分析蛋白質的結構奠定了基礎。
煙臺大學學報·哲學社會科學版雜志要求:
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