嘌呤霉素介導的人真皮微血管內皮細胞的分離純化培養與鑒定
侯慧; 李嬌; 梁見楠; 周玲; 梁艷陽; 侯瑞霞; 李俊琴; 張開明 免疫性皮膚病干細胞山西省重點實驗室; 太原市中心醫院皮膚科; 山西太原030009
關鍵詞：內皮細胞 嘌呤霉素 細胞純化培養
摘要：目的獲取純度較高的人真皮微血管內皮細胞(HDMEC)。方法取手術切除的多余包皮剪碎,通過兩次酶消化接種于35 mm 6孔板中,加入含0.5μg/mL嘌呤霉素的內皮細胞培養基,3 d后更換新鮮培養基;采用倒置單光子共聚焦顯微鏡觀察內皮細胞形態;流式細胞術檢測HDMEC細胞表面標志CD31的表達情況。結果培養72 h后可見內皮細胞長出,細胞呈圓形,生長至第5天左右,以梭形細胞為主,第6~10天迅速增殖,形成比較緊密的融合細胞,細胞集落中心為圓形細胞,周圍為梭形,呈放射狀,第10天可達80%融合,細胞呈典型鋪路石樣,可見“漩渦狀”特征。流式細胞術檢測顯示HDMEC的CD31表達陽性,CD44表達陰性,內皮細胞純度達98%以上。結論該方法能夠成功獲得高純度的人真皮微血管內皮細胞HDMEC,對皮膚疾病致病機制以及HDMEC的生物學特性和功能的深入研究具有重要意義。
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