生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的鑒定及耐藥分子特征研究
關鍵詞：生鮮乳 金黃色葡萄球菌 基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜 耐藥質粒
摘要：為了解生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌(S.aureus)的污染及耐藥情況,研究其耐藥的分子特征,本研究利用國標法分離了來自浙江杭州市某奶牛場99份生鮮乳中的S.aureus,通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)進行鑒定,對其進行質譜聚類分析和16S r DNA系統發育分析,采用微量肉湯稀釋法測定其最小抑菌濃度(MIC),利用Illlumina Hi Seq 4000平臺對其進行全基因組測序,通過Res Finder數據庫分析其耐藥基因,利用EasyFig和BRIG軟件進行耐藥質粒比對分析。結果顯示在99份生鮮牛乳中共分離到5株S.aureus (5.1%),其質譜聚類和16S r DNA系統發育分析樹形具有較高一致性。發現兩株耐甲氧西林S.aureus (MRSA) SABHZ053和SABHZ079,且其多位點序列分型(MLST)同為ST965,其中菌株SABHZ079對青霉素、紅霉素、克林霉素、頭孢西丁、氧氟沙星、替米考星和慶大霉素7種抗生素耐藥。全基因組測序分析后顯示菌株SABHZ053和SABHZ079的染色體中均含有aph(3’)-III、ant(6)-Ia和mecA耐藥基因。菌株SABHZ053存在2個耐藥質粒,pSA053-1 (4 439 bp)介導tet(K)對四環素類耐藥,pSA053-2 (34 609 bp)介導blaZ對青霉素耐藥。菌株SABHZ079有3個耐藥質粒,其中pSABHZ079-1 (39 227 bp)與pSA053-2同源,但相對插入了Tn551-erm(B)-aph(2’’)-Ia轉座單元,可以介導其對大環內脂類和慶大霉素的耐藥,質粒pSABHZ079-2 (2 473 bp)介導erm(C)對大環內脂類耐藥,而質粒pSABHZ079-3(4 439 bp)與pSA053-1完全相同。另外,本研究顯示耐藥質粒pSABHZ079-1可分為骨架I和II兩部分,可能分別由來自人源的pNTUH3874與pN315或其相似質粒雜合而來。本研究揭示了該奶牛場生鮮乳中S.aureus耐藥性的分子特征,表明耐藥質粒和轉座元件是其耐藥性產生的重要因子,為奶牛場合理用藥和控制S.aureus的抗藥性提供重要參考。
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