白介素2與梅毒螺旋體膜蛋白Gpd雙價核酸疫苗的免疫活性及保護(hù)作用研究
關(guān)鍵詞：密螺旋體 蒼白 疫苗 dna 白細(xì)胞介素2
摘要：目的探討白介素2（IL-2）基因與梅毒螺旋體（Treponema pallidum，Tp）Gpd抗原編碼基因融合構(gòu)建雙價核酸疫苗免疫新西蘭兔后的免疫應(yīng)答效果及感染Tp后的保護(hù)作用。方法定向克隆構(gòu)建真核表達(dá)重組體pcDNA3．1（＋）／Gpd—IL-2，與先期構(gòu)建的pcDNA3．1（＋）／Gpd真核表達(dá)重組體分別設(shè)為兩個疫苗實(shí)驗(yàn)組，同時設(shè)pcDNA3．1（＋）空質(zhì)粒對照組及PBS對照組，共4組，每組18只雄性新西蘭兔，肌肉多點(diǎn)注射初次免疫，于初次免疫后第10周各實(shí)驗(yàn)組兔皮下接種Tp標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測不同時間點(diǎn)免疫兔特異性抗體產(chǎn)生水平和脾細(xì)胞IL-2及干擾素γ（IFN-γ）誘導(dǎo)水平，噻唑藍(lán)法檢測兔脾淋巴細(xì)胞增殖水平。結(jié)果用pcDNA3．1（＋）／Gpd—IL-2融合雙價疫苗和pcDNA3．1（＋），Gpd單基因疫苗在免疫期間和感染期間均能檢測到高滴度的IgG特異性抗體，最高滴度分別可達(dá)1：4096和1：1024（P值均〈0．01）；兩疫苗組之間在免疫及感染期間不同時間點(diǎn)比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均〈0．01）；免疫后第8周雙價融合核酸疫苗組及單基因核酸疫苗組兔脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ分別為（447±22．4）μg／L、（225±17．6）μg／L，IL-2分別為（167±15．7）μg／L、（110±12．6）μg／L，均高于空質(zhì)粒對照組和空白對照組（P值均〈0．01）；感染期間不同時間點(diǎn)兔脾細(xì)胞受相應(yīng)蛋白刺激均有明顯增殖反應(yīng)，檢測指標(biāo)均顯著高于空質(zhì)粒對照組和空白對照組（P值均〈0．01）。早期感染皮損觀察顯示雙價融合核酸疫苗組較之單基因疫苗組有著更低的皮損Tp檢測陽性率（17．5％）、潰瘍病灶發(fā)生率（15％）以及更短的皮損愈合時間。結(jié)論用pcDNA3．1（＋）／Gpd—IL-2雙基因融合疫苗在兔體內(nèi)能更有效地誘導(dǎo)保護(hù)性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。
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