Ad-LIF-OSM雙基因轉(zhuǎn)染飼養(yǎng)細(xì)胞對臍血造血細(xì)胞體外增殖和分化的影響
關(guān)鍵詞：腺病毒 白血病抑制因子 抑瘤素m 共表達(dá)載體
摘要：目的構(gòu)建表達(dá)人白血病抑制因子（LIF）和抑瘤素M（OSM）雙基因的WI-38人胚肺成纖維細(xì)胞，并以此細(xì)胞作為飼養(yǎng)層細(xì)胞觀察其對CD34造血干／祖細(xì)胞體外增殖和分化的影響。方法以雙啟動(dòng)子轉(zhuǎn)移載體pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。為基礎(chǔ)，將OSM基因片段酶切后插入，構(gòu)建出轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM。將構(gòu)建正確的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化，獲得重組腺病毒載體pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM，通過包裝，收獲重組腺病毒（Ad-LIF-OSM）。將重組腺病毒感染飼養(yǎng)層細(xì)胞，經(jīng)RT．PCR、ELISA法檢測外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)；體外與CD34造血干／祖細(xì)胞共培養(yǎng)后，通過Transwell法和細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測，比較各實(shí)驗(yàn)組干／祖細(xì)胞體外擴(kuò)增與分化情況。結(jié)果測序結(jié)果顯示重組載體中的LIF和OSM基因序列正確；轉(zhuǎn)基因飼養(yǎng)層細(xì)胞中能檢測到外源LIF和OSM基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)；外源LIF和OSM基因在造血干／祖細(xì)胞體外培養(yǎng)中能夠發(fā)揮作用。結(jié)論成功構(gòu)建攜帶人LIF和OSM的雙基因重組腺病毒載體（Ad-LIF-OSM），Ad-LIF．OSM在造血干／祖細(xì)胞體外培養(yǎng)的過程中能夠有效地?cái)U(kuò)增CD34造血干／祖細(xì)胞，并延緩其分化。
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