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FTY720誘導多發性骨髓瘤細胞株U266自噬與凋亡的研究

廖愛軍; 胡榮; 李迎春; 姚鯤; 王慧涵; 張嶸; 楊威; 劉卓剛 中國醫科大學附屬盛京醫院血液科; 沈陽110003

關鍵詞:免疫抑制劑 fty720 多發性骨髓瘤 細胞凋亡 自吞噬作用 

摘要:目的探討新型免疫抑制劑FTY720對多發性骨髓瘤細胞株U266細胞凋亡及自噬的影響,并探討相關的作用機制。方法0、2.5、5.0、10.0及20.0μmol/LFTY720處理U266細胞24h后,應用CCK_8方法檢測不同濃度FTY720對U266細胞生存率的影響;20.0μmol/LFTY720分別處理細胞0、2、6及24h,通過CCK-8方法檢測FTY720作用不同時間對U266細胞生存率的影響。同時應用流式細胞術AnnexinV—FITC/PI染色檢測相應的細胞凋亡率。不同濃度FTY720處理U266細胞后,應用Western blot法檢測微管相關蛋白輕鏈3(LC3)B的表達,明確應用FTY720后是否引起細胞發生自噬。FTY720單用或聯合應用自噬抑制劑Bafilomycin A1處理U266細胞24h,檢測細胞生存率及凋亡率,并檢測其對抗凋亡因子survivin表達的影響。結果應用FTY720后,U266細胞生存明顯受抑制,可引起細胞發生凋亡,作用呈濃度及時間依賴性。LC3B-Ⅱ表達明顯增加,呈濃度依賴性,表明FTY720可引起細胞發生自噬。應用自噬抑制劑Bafilomycin A1后,可解救FTY720引起的細胞生存抑制及凋亡,同時可解救FTY720引起的survivin表達下降。結論FTY720可引起U266細胞發生凋亡及自噬,自噬對凋亡具有促進作用。其機制可能為通過自噬在溶酶體降解了survivin等抗凋亡因子或其上游調控因子,從而促進細胞凋亡。

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