利用酵母雙雜交系統篩選大豆結瘤因子受體NFR1α的互作蛋白
關鍵詞：大豆 共生固氮 結瘤因子受體蛋白 酵母雙雜交 豆血紅蛋白
摘要：大豆是重要的植物蛋白作物和糧豆間作作物,挖掘大豆的生物固氮潛力,對推動生態農業的可持續發展具有深遠意義。大豆結瘤因子受體蛋白GmNFR1?(Nod Factor Receptor)對結瘤至關重要,但其具體調控機制尚不明確。本研究以大豆mRNA為模板,利用RT-PCR方法擴增到GmNFR1α蛋白的激酶結構域(GmNFR1α-pk),構建了pGBKT7-GmNFR1α-pk誘餌表達載體,通過酵母雙雜交技術,篩選大豆根瘤AD-cDNA文庫,從文庫中分離到與GmNFR1α-pk相互作用的71個陽性克隆,經測序和同源性分析篩選到12種與GmNFR1α-pk互作的蛋白,包括鈣離子結合手性蛋白、豆血紅蛋白、結瘤素Nod44等蛋白。以大豆豆血紅蛋白GmLbc2為例,回轉酵母以及煙草體內BiFC驗證其與誘餌蛋白的相互作用,對其進行同源蛋白比對及系統進化樹分析,并利用百脈根毛根轉化技術鑒定GmLbc2在結瘤過程中的生物學功能。研究結果進一步補充和完善了GmNFR1α介導的結瘤信號傳遞途徑,為大豆與根瘤菌共生互作機制提供了新的分子證據。
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