基于URP-PCR多態(tài)性片段的苦瓜枯萎病菌特異性檢測技術(shù)的建立
關(guān)鍵詞：苦瓜枯萎病 尖孢鐮孢菌苦瓜專化型 分子檢測
摘要：通過URP(Universal Rice Primers)-PCR分析尖孢鐮孢菌苦瓜專化型基因組DNA擴(kuò)增片段多態(tài)性,篩選檢測尖孢鐮孢菌苦瓜專化型的特異性引物,并建立了基于該引物的PCR檢測方法。結(jié)果表明,特異性引物為FOMM-SPF/FOMMSPR,PCR檢測體系為25μL,包括2'Green Taq M aster Mix 12.5μL,10 mmol·L-1的上下游引物各1μL,模板DNA 1μL,滅菌去離子水補(bǔ)足至25μL;PCR程序?yàn)?5℃預(yù)變性3 min,94℃變性15 s,57℃退火30 s,72℃延伸20 s,共30個循環(huán),循環(huán)結(jié)束后72℃延伸5 min;特異性擴(kuò)增片段大小294 bp,檢測靈敏度為2 ng·μL-1DNA或50個孢子·500 mg-1土壤。該引物及其檢測方法對尖孢鐮孢菌苦瓜專化型的檢測特異性好、靈敏度高,可以從土壤和植物樣品中快速準(zhǔn)確地檢測出苦瓜枯萎病菌,無需病原菌的分離培養(yǎng)和致病性檢測,對苦瓜枯萎病的早期診斷和預(yù)警及有效防控具有重要的指導(dǎo)意義。
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