鐵線蓮屬植物ISSR-PCR反應體系優化及遺傳多樣性分析
關鍵詞：鐵線蓮屬 反應體系優化 遺傳多樣性
摘要：對鐵線蓮屬(Clematis Linn.)植物基因組DNA的ISSR-PCR反應體系進行了優化,并采用ISSR分子標記對32個鐵線蓮屬植物(包括8個野生種、1個變種和23個品種)及2個近緣屬植物的遺傳多樣性進行研究。結果顯示:鐵線蓮屬植物基因組DNA ISSR-PCR最佳反應體系的總體積為25.0μL,包括40 ng·μL^-1模板DNA 1.0μL、0.4μmol·L^-1引物1.0μL、0.15 mmol·L^-1dNTPs 2.0μL、10×Ex Taq Buffer(Mg2+ Plus) 2.0μL、TaKaRa Ex Taq酶0.2μL和ddH2O 18.8μL。對32個鐵線蓮屬植物及2個近緣屬植物基因組DNA的ISSR-PCR分析結果顯示:共擴增出172個條帶(位點),平均每條引物擴增出13.2個位點,其中,多態性位點168個,平均每條引物擴增出12.9個多態性位點,平均多態性位點百分率為98.2%。聚類分析結果顯示:32個鐵線蓮屬植物及2個近緣屬植物的遺傳距離在0.22~1.21之間。在遺傳距離1.02處,將32個鐵線蓮屬植物分為3個大組,‘杰出’(‘Superba’)單獨聚為1個大組,‘斯托爾韋克’(‘Stolwijk Gold’)和‘檸檬之夢’(‘Lemon Dream’)聚為1個大組,其余植物聚為第3大組;在遺傳距離0.92處,將第3大組進一步劃分為3個亞組,第1亞組包括‘阿迪森’(‘Addisonii’)、‘帕斯卡’(‘Pascal’)和‘櫻桃唇’(‘Cherry Lip’),第2亞組包括短柱鐵線蓮(C.cadmia Buch.-Ham. ex Wall.)、灰葉鐵線蓮[C.canescens(Turcz.) W. T. Wang et M. C. Chang]、毛蕊鐵線蓮(C.lasiandra Maxim.)、曲柄鐵線蓮(C.repens Finet et Gagnep.)、‘鈴兒響叮當’(‘Jingle Bells’)和‘雀斑’(‘Freckles’),第3亞組包括吳興鐵線蓮(C.huchouensis Tamura)等20個鐵線蓮屬植物;在遺傳距離0.77處,將第3亞組劃分為7個小組。研究結果表明:ISSR分子標記能夠應用于鐵線蓮屬植物的遺傳多樣性分析。
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